Super Mario USA volgt Mario, Luigi, Toad en Prinses Peach terwijl ze naar de droomwereld Subcon reizen om de bevolking te redden van Wart, een kikkerkoning die het land in zijn greep heeft.
De game voegt een centraal til- en gooisysteem toe, waarmee personages groenten uit de grond kunnen trekken of vijanden kunnen oppakken en als wapens kunnen weggooien. Spelers kunnen kiezen uit vier verschillende personages, elk met eigen loopsnelheid en springvermogen.
Super Mario USA bestaat uit zeven werelden, en elke wereld is opgedeeld in drie stages voordat alles uitmondt in eindbaasgevechten waarin zorgvuldig gebruik van items belangrijk is. Spelers doorkruisen zowel de oppervlakte als de subruimte, terwijl magische drankjes verborgen plekken openen vol munten en power-ups.
Voor het eerst uitgebracht in Japan als Yume Kōjō: Doki Doki Panic, presenteert Super Mario USA een eigen visuele stijl en gameplaystructuur die het onderscheidt van de standaard Super Mario Bros.-formule.