Super Mario USA theo chân Mario, Luigi, Toad và Công chúa Peach trong hành trình vào thế giới mơ Subcon để cứu người dân nơi đây khỏi Wart, một vị vua cóc đã chiếm quyền kiểm soát vùng đất.
Trò chơi bổ sung hệ thống nâng và ném ở trung tâm lối chơi, cho phép các nhân vật nhổ rau củ từ mặt đất hoặc nhặt kẻ địch lên rồi ném chúng như vũ khí. Người chơi có thể chọn trong bốn nhân vật riêng biệt, mỗi người có tốc độ chạy và khả năng nhảy khác nhau.
Super Mario USA gồm bảy thế giới, và mỗi thế giới được chia thành ba màn trước khi kết thúc bằng các trận đấu trùm, đòi hỏi sử dụng vật phẩm cẩn thận. Người chơi di chuyển qua cả khu vực bề mặt lẫn không gian phụ, với những lọ thuốc thần kỳ mở ra các chỗ ẩn chứa đầy xu và vật phẩm tăng sức mạnh.
Lần đầu phát hành tại Nhật Bản với tên Yume Kōjō: Doki Doki Panic, Super Mario USA mang phong cách hình ảnh và cấu trúc gameplay riêng, khiến nó khác biệt so với công thức Super Mario Bros. tiêu chuẩn.