Super Mario USA में मारियो, लुइगी, टोड और प्रिंसेस पीच सबकॉन की स्वप्न दुनिया की यात्रा करते हैं, ताकि वहाँ के लोगों को वार्ट से बचा सकें, जो एक टोड राजा है और जिसने उस भूमि पर कब्ज़ा कर लिया है।
यह गेम एक केंद्रीय उठाने-और-फेंकने वाली प्रणाली जोड़ता है, जिससे पात्र जमीन से सब्जियाँ खींच सकते हैं या दुश्मनों को उठाकर हथियार की तरह फेंक सकते हैं। खिलाड़ी चार अलग-अलग पात्रों में से चुन सकते हैं, जिनकी दौड़ने की गति और कूदने की क्षमताएँ अलग-अलग हैं।
Super Mario USA में सात दुनिया हैं, और हर दुनिया तीन चरणों में बँटी है, जिसके बाद बॉस लड़ाइयाँ आती हैं जिनमें सावधानी से वस्तुओं के उपयोग की जरूरत होती है। खिलाड़ी सतह और सब-स्पेस दोनों क्षेत्रों से होकर आगे बढ़ते हैं, जहाँ जादुई औषधियाँ छिपी जगहें खोलती हैं, जिनमें सिक्के और पावर-अप भरे होते हैं।
जापान में पहली बार Yume Kōjō: Doki Doki Panic के रूप में जारी किया गया, Super Mario USA एक अलग दृश्य शैली और गेमप्ले संरचना प्रस्तुत करता है, जो इसे सामान्य Super Mario Bros. फ़ॉर्मूले से अलग बनाती है।